Лейкоз крупного рогатого скота широко распространен во многих странах мира. Наиболее часто он встречается в США, в ряде стран Центральной Европы, Дании, Швеции и странах Ближнего Востока. Лейкоз крупного рогатого скота диагностируют также в странах Африки и Австралии. В нашей стране в последние годы эта проблема стоит наиболее остро. С 1997 г. в РФ эта болезнь прочно занимает первое место в структуре инфекционной патологии. Наивысший уровень инфицированности вирусом лейкоза крупного рогатого скота зарегистрирован в Краснодарском крае, Тюменской области, Самарской, Псковской, Владимирской, Ростовской, Республике Марий-Эл, Новго-родской области. Неблагополучна по лейкозу и Саратовская область. Установлено, что стадный прирост уровня инфицированных животных со-ставляет в среднем 2,5 % в год. Вирус лейкоза может передаваться пренатально и постнатально. Пренатальная (внутриутробная) передача ВЛ КРС не превышает 10 %. Вирус передается с инфицированными лимфоцитами. Экспериментально установлено, что для заражения достаточно 0,5 мкл крови. При несоблюдении санитарных правил болезнь может распространиться ятрогенным путем. Вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС) может существовать в двух формах: геномной одноцепочечной РНК или в виде ДНК, синтезированной на геномной РНК как на матрице, и интегрированной в хромосому клетки-хозяина в виде провируса. Первичный диагноз на лейкоз крупного рогатого скота в хозяйстве ставят на основании эпизоотологических, серологических, клинико-гематологических и патологоанатомических данных. В последние годы ряд исследователей для диагностики лейкоза крупного рогатого скота предлагают полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Молекулярно-генетический метод позволяет выявить практически всех инфицированных ВЛ КРС животных. Этот метод позволяет определить непосредственно вирус или провирус у инфицированных животных. ПЦР обладает рядом преимуществ: чувствительность от 1 нуклеиновой кислоты в образце, специфичность до 100 %, быстрота проведения и возможность полной автоматизации, универсальность, возможность количественного учета и выявления инфекции на ранних сроках (первые дни жизни). Цель наших исследований – проведение комплексной лабораторной диагностики лейкоза крупного рогатого скота для сравнительной оценки возможностей серологического и молекулярно-генетического методов лабораторных исследований. А также уточнение эпизоотической обстановки по лейкозу крупного рогатого скота в Саратовской области по результатам лабораторных исследований. Материалом для исследования методом ПЦР явились 271 проба крови и 271 проба молока, от коров принадлежащих ООО «Ягоднополянское Татищевского района». Для сравнительного анализа и уточнения эпизоотологической обстановки были использованы статистические данные управления ветеринарии Правительства Саратовской области, ФГБУ «Саратовская межобластная ветеринарная лаборатория Референтного центра» и ОГУ «Татищевская районная ветеринарная лаборатория СББЖ» Саратовской области. Выявление провируса лейкоза в молоке и крови осуществляли методом ПЦР с использованием набора «Лейкоз» производства «ИнтерЛабСервис» (Москва). Выделение нуклеиновых кислот провируса осуществляли методом нуклеосорбции на селикогеле, как наиболее эффективном для исследования данного биоматериала. Амплификацию проводили в термоциклере «Ампли-4» фирмы «Биоком» (Москва). Детекцию продуктов амплификации осуществляли методом горизонтального гельэлектрофореза на оборудовании производства фирмы «Биоком». Результаты серологических и гематологических исследований свидетельствуют, что уровень инфицированности лейкозом крупного рогатого скота в различных районах Саратовской области варьирует. Наименьшие показатели отмечаются в г. Саратове (1,6 %) и Саратовском районе (3,5 %), максимальный уровень наблюдается по частному сектору Саратовской области (33,3 %), где также выявляется наибольшее количество больных (9 гол.) и подозрительных в заболевании (8 гол.) животных (по результатам гематологических исследований). Для сравнительной оценки эффективности РИД и ПЦР при диагностике лейкоза КРС, параллельно был исследован биоматериал (кровь и молоко) от 271 головы крупного рогатого скота методами ПЦР и РИД. В РИД с сывороткой крови от этих животных, по данным ОГУ «Татищевская районная ветеринарная лаборатория СББЖ» Саратовской области, положительные результаты (наличие противолейкозных антител) были отмечены в 43 пробах. При использовании ПЦР, наличие провирусной ДНК вируса лейкоза КРС было выявлено у 141 животного. ДНК вируса лейкоза КРС обнаруживалась как в цельной крови, так и в сыворотке, а также в ресуспензированном с забуференным физиологическим раствором кровяном сгустке и в цельном молоке от больных животных. Результаты исследования методом РИД были подтверждены в ПЦР. Кроме того, при помощи ПЦР было дополнительно выявлено 88 инфицированных ВЛ КРС животных. ПЦР позволила выявить на 36% больше инфицированных жи-вотных, чем РИД. Таким образом, при проведении параллельных исследований, эффективность молекулярно-генетического метода оказалась в 1,63 раз выше чем серологического. В результате исследований молока методом ПЦР было установлено, что все пробы от инфицированных ВЛ КРС животных, также оказались положительными. Выводы 1. Анализ результатов лабораторных исследований (РИД и ПЦР) свидетельствует о высоком уровне инфицированности вирусом лейкоза крупного рогатого скота в Саратовской области. 2. Для ПЦР-диагностики лейкоза крупного рогатого скота, возможно использовать все биологические жидкости организма животного, содержащие провирусную ДНК, в том числе молоко и различные фракции крови. 3. Проведенный сравнительный анализ показал, что молекулярно-генетический метод диагностики лейкоза крупного рогатого скота по чувствительности превосходит серологический в 1,63 раза.
Источник: http://www1.asau.ru/doc/nauka/vestnik/2012/4/Veterinaria_Agoltsov.pdf | 